活细胞的“聚光灯”——前沿活细胞成像的案例分享

活组织的“聚光灯"——先进活组织三维成像的例案分享一下

癌血肿瘤癌体体细胞膜膜核核是切寿命的常见企业，包括了多种不同各种各样的鱼的寿命体。这样设计癌血肿瘤癌体体细胞膜膜核核的设计及及实物寿命生活组织整个过程能否帮住我深些入地探析探讨性寿命的奥密，了解一下寿命体是如何才能实现和运转的。普通的癌血肿瘤癌体体细胞膜膜核核显微术就只能参与分析固定不变的癌血肿瘤癌体体细胞膜膜核核标本采集参与预测，但早已失“活"的癌血肿瘤癌体体细胞膜膜核核早已始终始终无法生理变化现象新陈消化吸收、走势牵张反射等寿命生活组织，始终始终无法生理变化现象活癌血肿瘤癌体体细胞膜膜核核的完美问题。这样活癌血肿瘤癌体体细胞膜膜核核显微术越发越因为寿命有效设计专家的垂青，都可以在癌血肿瘤癌体体细胞膜膜核核如果拉新并罚于正常情况生理变化生活组织的情形下参与分析，帮住有效家最佳地设计癌血肿瘤癌体体细胞膜膜核核间的彼此反应，及及参与制剂产品研发和选择等方便的适用。在这个里，我收拾了近几年来里来于Lumencor的白灯led灯光采用于活癌血肿瘤癌体体细胞膜膜核核显微术的前端设计，都希望能为您的设计所带来美感。

肿瘤(liu)(liu)体(ti)细胞(bao)内部(bu)人员Ca2+，线(xian)粒(li)体(ti)膜电极电位和肿瘤(liu)(liu)体(ti)细胞(bao)质乳酸的延长时间显像

来自威斯康星大学麦迪逊分校Sophia M. Sdao, Thuong Ho, Chetan Poudel等科学家研究了CDK2和β活细胞之间的关系，发现CDK2可以抑制β活细胞的氧化糖代谢和胰岛素分泌，同时对β细胞的代谢信号和K(ATP)通道有重要影响。作者利用一个可诱导的β细胞特异性CDK2缺失的小鼠模型(CDK2-IKO)进行研究，发现这种小鼠的葡萄糖耐受性和葡萄糖刺激的胰岛素分泌都有所提高。实验中通过多种方法测量了CDK2-IKO小鼠的β细胞电活性、钙信号、NAD(P)H荧光寿命、乳酸水平和线粒体膜电位。在搭建怎么延时显像生物传感器时，采用Lumencor SOLA SEII 365作为荧光激发光(guang)源，并且基于Lumencor精确的电(dian)子控制系统，可以(yi)快速调节光(guang)输(shu)出(chu)的强度(du)，设置为<20%的功率输(shu)出(chu)。

对比文献资料Sdao S M , Ho T , Poudel C ,et al.CDK2 limits the highly energetic secretory program of mature β cells by restricting PEP cycle-dependent KATP channel closure[J].Cell Reports, 2021, 34(4):108690.DOI:10.1016/j.celrep.2021.108690.

HuH-7人肝(gan)癌(ai)血(xue)细胞中GFP展现的(de)201天(tian)延(yan)长时间激光散斑(ban)

非病毒基因递送是基因治疗领域的一个快速发展的研究课题，其低免疫原性避免了免疫系统对外源基因的排斥和攻击，提高了基因治疗的安全性和有效性，但受到合成核酸纳米载体在内吞体内停留时间的限制。为了克服这种瓶颈，需要一种能够同时测量纳米载体的摄取动力学和转染效率的方法。慕尼黑大学的研究人员A. Reiser, D. Woschée, N. Mehrotra等人使用单细胞阵列的活组织成相(LISCA)来研究不同血清条件下基于脂质mRNA复合物的递送时间分布，文中使用HuH-7肝癌细胞作为系统模型（RNA治疗的主要靶器官之一）。该方法可以同时监测数百个单细胞的eGFP报告基因表达，通过拟合到模型，即可得到每个单细胞的表达起始时间和表达速率等参数。本文采用微结构单细胞阵列和自动活细胞延时显微镜来收集单个荧光时间过程。其中用于延时电路激光散斑的时间分辨荧光显微镜搭载的即是来自Lumencor的SOLA-SE II LED光源。

参照医学文献Reiser A ,D Woschée, Mehrotra N ,et al.Correlation of mRNA delivery timing and protein expression in lipid-based transfection[J].Integrative Biology, 2019, 11(9).DOI:10.1093/intbio/zyz030.

用mtk量多色荧光显(xian)微镜(jing)查看单独一个(ge)消化道杆菌血细胞双(shuang)链脱落休(xiu)复

来自瑞典乌普萨拉大学和皇 jia理工学院的(de)研究人员Wiktor J, Gynnå A H, Leroy P等在(zai)Nature上发(fa)表了一(yi)篇探索活细(xi)菌中(zhong)RecA螺旋丝如(ru)何通过同源重组修复双链DNA断裂（DSB）机制的(de)文章。在(zai)一(yi)个可诱导(dao)的(de)DSB系统中(zhong)，利用(yong)mtk量、微流(liu)控(kong)和荧(ying)光显微技术，直接(jie)观察大肠杆菌中(zhong)DSB修复的(de)过程，以及RecA蛋白在(zai)修复中(zhong)的(de)动态(tai)变化，如(ru)下(xia)图中(zhong)所(suo)展示的(de)。

在搭建实验所用的荧光显微镜时，Lumencor的Spectra III 系列的荧光光源与Nikon的Ti2-E倒置显微镜以及Andor的Sona 4.2B-11 scmos相机组合使用。显微镜由运行内建插件Micro-Manager控制。而荧光光源由相机通过TTL连接触发，使用电子快门控制(zhi)。Lumencor的TTL触(chu)发输(shu)入可以(yi)外部(bu)控制(zhi)集成(cheng)的八个光源的选(xuan)择以(yi)及开(kai)关(guan)，凭借精确的电子控制(zhi)，切换(huan)速度间隔(ge)可达10μs。

 考生文献资料Wiktor J, Gynnå A H, Leroy P, et al. RecA finds homologous DNA by reduced dimensionality search[J]. Nature, 2021, 597(7876): 426-429.

基因遗传编(bian)码查询电流(liu)值指(zhi)令(ling)剂 （GEVI） JEDI-1P 在(zai)解离(li)的大鼠(shu)皮料和海(hai)马(ma)感觉神(shen)经元中的三维(wei)成(cheng)像

使用基因编码的电压指示剂（GEVI）进行宽场成像是了解大型皮层网络在神经编码行为中的作用的一种有前景的方法。莱斯大学以及埃默里大学的研究人员开发了一种针对单光子成像优(you)化的(de)(de)GEVI和改(gai)进的(de)(de)方法，应用于(yu)小鼠长期(qi)的(de)(de)全脑(nao)输出功(gong)率显像。并通(tong)过(guo)一(yi)个(ge)自动(dong)化高(gao)(gao)通(tong)量筛选平台，使其具(ju)有(you)快速(su)的(de)(de)动(dong)力学、高(gao)(gao)亮度、高(gao)(gao)灵敏度和在(zai)宽常单光(guang)(guang)子照(zhao)明下的(de)(de)高(gao)(gao)光(guang)(guang)稳定性。在(zai)多(duo)轮定向进化后，产(chan)生(sheng)了在(zai)所(suo)有(you)指(zhi)标上都有(you)所(suo)提高(gao)(gao)的(de)(de)JEDI-1P，这是一(yi)种绿(lv)色的(de)(de)荧(ying)光(guang)(guang)指(zhi)示剂，zui终研究人员成功(gong)在(zai)清醒(xing)小鼠中实现(xian)了稳定的(de)(de)全脑(nao)电(dian)压成像。

为了以高通量的方式评估GEVI的性能，研究人员搭建了一个基于倒置显微镜（A1R-MP,Nikon Instruments）自动化多模式的96孔筛选平台。由Lumencor的LED光引擎（SpectraX）产生激发光，通过液态光波导（LLG）引导至显微镜的荧光顶置照明器。其中青色光(中心波长/带宽，470/24nm)和绿光(550/15nm)通过物镜分别照(zhao)射到样品台上，激发基于(yu)GFP的GEVI以及mCherry。

Fura-2 Ca2+在(zai)小鼠垂体(ti)生(sheng)殖细胞中的激光散斑

为了探究蛋白酪氨酸磷酸酶受体N和N2（PTPRN和PTPRN2）在小鼠繁殖过程中的性别特异性作用机制，美国国立卫生研究院的尤尼斯肯 ni 迪施莱佛guo家儿童健康与人类发展研究所 (Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health and Human Development)的研究人员对PTPRN和PTPRN2进行双敲除（DKO）,结果导致雌性小鼠不育，表现出青春期延迟、无排卵、卵巢基因表达和类固醇合成的改变。而雄性小鼠则大部分育性不受影响，睾丸的基因表达、类固醇合成以及生殖器官的发育没有明显影响。在研究过程中，钙铝离子显像高技术被用于研究垂体细胞的成像，研究PTPRN和PTPRN2的缺失对垂体促性腺激素细胞（gonadotrophs GnRH）的钙信号的影响。340/30nm和380/20 nm的激发带通由Retra II光引擎（Lumencor,Beaverton,OR）提供，激发带通通过510/84nm的滤光片进行了检测。

图例动态展示一些GnRH（100pM）诱骗培養垂体細胞中的钙走势数据库。检测选择始于WT和DKO雄性和雌性小鼠的細胞完成。 

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